博雅辑因与魏文胜课题组联合公开新技术,增强CRISPR高通量筛选( 二 )

iBar技术通过重新设计的sgRNA被赋予多条分子条码(Internal Barcode , iBar , 如图所示) 。

博雅辑因与魏文胜课题组联合公开新技术,增强CRISPR高通量筛选

----博雅辑因与魏文胜课题组联合公开新技术 , 增强CRISPR高通量筛选//----

这些内置分子条码能够多次、独立追踪sgRNA富集程度 , 结合重新适配的MAGeCKiBAR的生物信息学分析方法 , 成功避免了在高感染复数条件下的“搭车效应” , 提高了数据可靠性 。 与常规筛选比较 , iBAR方法提高了功能性筛选的敏感性 , 显著降低由于高感染复数建库筛选中产生的高假阳性和假阴性 。

魏文胜课题组在率先在2014至2018年 , 先后实现了针对蛋白质编码基因和长链非编码RNA的高通量功能性筛选(Zhou et al. Nature 2014; Zhu et al. Nature Biotechnology 2016; Liu et al. Nature Biotechnology 2018) 。 而本次与博雅辑因联合发表的iBar技术 , 则首次实现了在高MOI条件下的高通量功能性筛选 , 显著降低了工作量 , 提高了筛选准确性 , 为在原代细胞或动物体内筛选提供了重要工具 。