使用非病毒方法生产 CAR-T 细胞( 四 )

15 多年前就报道了通过 RNA 电穿孔成功改造小鼠模型中的 T 细胞 [52] ，此后在这方面取得了重大进展 [53, 54] 。 mRNA 介导的 CAR 的临床前测试表明该方法适用于治疗实体瘤 [55, 56] 。除了电穿孔，最近在 CAR T 细胞的制备中证明了使用脂质纳米颗粒作为 mRNA 转运的一种形式 [57] 。与电穿孔不同，这种方法对转导细胞的毒性要小得多。
尽管这两种方法都适用于 cGMP 质量的 CAR T 细胞生产，但电穿孔的使用频率要高得多。
2. CAR 实践：临床应用
基于 CAR T 细胞疗法的临床试验正在迅速发展，每年提交的临床试验批准请求越来越多。截至2016 年底，全球有 124 项正在进行的 CAR T 细胞疗法治疗血液系统恶性肿瘤的临床试验和 57 项针对实体瘤的临床试验注册[62] 。大多数这些试验是在美国或中国进行的。这些试验中不到 10% 是在欧洲进行的。
从那时起，情况发生了重大变化。根据ClinicalTrials.gov 的数据，在 CAR T 细胞疗法的各个阶段有 600 多项临床试验。大多数临床试验仍侧重于血液系统恶性肿瘤（其中 267 项试验涉及靶向 CD19 的 CAR）。尽管采用转座子载体的研究部分正在稳步增长，大多数正在进行的临床研究采用基于病毒的载体进行 CAR T 细胞制造。尽管在临床应用中尚未观察到对可能的载体诱导致癌激活的担忧，但仍存在理论风险 [63] 。
临床中使用的 LV 系统主要来自 HIV-1 病毒。已经实施了几种方法来减少 LV 载体的生物危害特性 [64] 。可用于临床实践的此类修饰的一个流行示例是四质粒系统，它能够有效地分割HIV-1 基因组，使病毒基因表达依赖于不同的分离转录单位和仅在生产细胞中表达的负责包装的基因(HEK293T细胞系经常使用）[65] 。携带部分 LV 载体的多个质粒的整合最终增加了大规模 CAR T 细胞制造的后勤复杂性；因此，仍然需要更优化的低压系统[66] 。病毒构建的 CAR 的主要临床应用仍然是治疗血液相关的恶性肿瘤 [67-69] 。
2.1.转座子临床试验
类似于基于病毒的 CAR ，转座子介导的 CAR T 细胞临床应用也主要集中在血癌 [23] 。通过 SB 载体转导的CD19 特异性 CAR T 细胞已经在 I 期临床试验中显示出有希望的结果 [31, 70, 71] 。制备 cGMP 级 CAR T 细胞（用于 I/II 期临床试验）的一种成功方法是利用 SB 系统 DNA 质粒的电穿孔和 T细胞与灭活的 aAPC（人工抗原呈递细胞）的共培养。尽管转座子介导的转导效果较差，但在 28 天的培养过程中重复制备了足够数量 (1010) 的 CAR T 细胞（95% 纯度）[72] 。分析使用过的 CAR 的 SB 整合谱显示移植细胞中没有明显的热点或整合偏差。
最近，来自 I/II 期临床试验的初步数据表明供体来源的 CD19+ CAR T 细胞的生物学安全性，为基于转座子的 CAR T 细胞的其他同种异体应用提供了机会 [71] 。然而，施用 CAR T 细胞的最佳剂量对于确保治疗的安全性至关重要，因为较高剂量的 CAR T 细胞会导致 I 期和 II 期 CRS [71] 。使 CRS 严重程度复杂化的另一个因素是疾病本身的严重程度。在患者接受造血干细胞移植后的短时间内使用 CAR T 细胞疗法（针对血癌）可能有益于降低 CRS 的风险并最终消除患者的残留疾病 [31] 。上述研究还记录了在自体和同种异体环境中 SB 介导的 CAR T 细胞的直接比较 [31] 。两种方法都产生了相当纯度的 CAR T 细胞，但自体 CAR T 细胞在患者体内的检测时间更长。自体试验患者的总生存率和 30 个月无进展率更高，但两种方法都比标准治疗的患者有显着改善 [73] 。